人ELISA試劑盒然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競爭結(jié)合反應(yīng)。競爭法測抗體有多種模式，可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競爭結(jié)合，抗HBc 一般采用此法。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競爭結(jié)合，洗滌后再加入酶標(biāo)抗體，與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)?？笻Be的檢測一般采用此法。

  小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，*的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。做了十多次的ELISA，能夠得到線性比較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，但是同樣濃度的標(biāo)準(zhǔn)品每次的OD值都不一致，樣品就更加慘不忍睹了，除了酶標(biāo)板之外，其余封閉蛋白，抗體，抗體稀釋度，等等條件都已經(jīng)更換過，但是問題還是沒能解決，懷疑是酶標(biāo)板的問題。求教各位高手，有什么方法可以快速驗證酶標(biāo)板的可靠性。

  人ELISA試劑盒本身靈敏性很高，每次做出來的值不一樣很正常，特別是od值比較大的時候更是差別很大，但是只要不要偏差太大就好，一般偏差要求10%內(nèi)吧，好的數(shù)據(jù)是3%內(nèi)。首先要穩(wěn)定所有的條件，不同的條件下做的板子讀值不一樣很正常。在同樣條件下同批次的板子，如果測定不一樣，就是包被問題或者保護(hù)劑的問題，但這兩個都是各個試劑盒的機(jī)密，zui好看看文獻(xiàn)里別人怎么做的。

  其次每次實(shí)驗的標(biāo)曲上同一濃度樣品的OD值不一樣是很正常的，這與抗原抗體反應(yīng)體系、作用時間、顯色時間等等一系列的因素有關(guān)。鑒定該ELISA體系是否可靠，*關(guān)鍵的指標(biāo)是加標(biāo)回收率和稀釋線性，如果你懷疑的話可以做一下。